Клонирование и экспрессия главных антигенных доменов гликопротеина Е2 вируса диареи крупного рогатого скота в клетках E. Coli

Abstract

Среди разнообразных патогенов крупного рогатого скота вирусная диарея (BVDV) занимает значительное место из-за вызываемых ею экономических убытков. Гликопротеин Е2 липидной оболочки, а именно его первые два антигенных домена А и В могут выступать в качестве субъединицы для создания рекомбинантной вакцины. Целью работы являлось клонирование гена, кодирующего антигенные домены А и В гликопротеина Е2 BVDV 2-ого типа, в составе вектора серии pET для его экспрессии в клетках E. coli. В результате работы в клетках штамма Е. coli BL21-Gold(DE3) в составе вектора pET-24b(+) клонированы оптимизированные для экспрессии гены DADB и DADBHis, кодирующие домены А и В гликопротеина Е2 вируса BVDV 2-го типа (ген DADB), в том числе с гистидиновой меткой (ген DADBHis). Результаты клонирования подтверждены ПЦР-анализом, рестрикционным анализом и секвенированием по Сэнгеру. Установлено, что индукция экспрессии генов DADB и DADBHisприводит к накоплению в клетках Е. coliв нерастворимой клеточной фракции белков по массе соответствующих белкам DADB и DADBHis (18,6 кДa и 19,4 кДa соответственно) в количестве около 30 % от общего внутриклеточного белка