Выделение, очистка и рефолдинг на матрице Ni-сефарозы рекомбинантного эфрина-А5

Abstract

Eph-рецепторы и их белковые лиганды–эфрины (ephrin) играют важную роль в физиологических и патофизиологическийх процессах, таких как эмбриональное развитие, ангиогенез, канцерогенез, болезнь Альцгеймера и других заболеваниях [1]. В связи с этим белки эфринновой системы рассматриваются как мишени для новых фармакологических препаратов и как важнейший инструмент для разработки средств иммунохимической и гистологической диагностики. Одним из методических подходов, позволяющих получить целевой продукт в заданных количествах, является его бактериальная экспрессия [2]. Проведено выделение рекомбинантного эфрина-А5 из телец включения (ТВ) E.coli. Двукратной отмывкой ТВ 50 ммоль/л Трисом и 50 ммоль/л NaCl удалено до 35 % примесей (по массе), включая посторонние белки и нуклеиновые кислоты. С помощью металл-хелатной хроматографии на Ni-сефарозе проведены дополнительная очистка целевого продукта от белков и нуклеиновых кислот и собственно процесс рефолдинга эфрина-А5 с выходом 8,35 ± 0,1 % и чистотой 85 %. Целью работы являлось выделение, очистка и рефолдинг на матрице Ni-сефарозы рекомбинантного эфрина-А5 из телец включения E.coli