Пожалуйста, используйте этот идентификатор, чтобы цитировать или ссылаться на этот документ:
https://elib.bsu.by/handle/123456789/283979
Заглавие документа: | Создание системы экспрессии гена колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) млекопитающих в бактериальных клетках : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель В. А. Прокулевич |
Авторы: | Прокулевич, В. А. Потапович, М. И. Кудин, К. В. Сауткина, Н. В. Голенченко, С. Г. Жидецкий, А. В. Кудина, И. В. Острикова, К. В. Миронович, Л. М. Титова, А. Д. |
Тема: | ЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Биология ЭБ БГУ::ТЕХНИЧЕСКИЕ И ПРИКЛАДНЫЕ НАУКИ. ОТРАСЛИ ЭКОНОМИКИ::Биотехнология ЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Химия ЭБ БГУ::ТЕХНИЧЕСКИЕ И ПРИКЛАДНЫЕ НАУКИ. ОТРАСЛИ ЭКОНОМИКИ::Химическая технология. Химическая промышленность ЭБ БГУ::ТЕХНИЧЕСКИЕ И ПРИКЛАДНЫЕ НАУКИ. ОТРАСЛИ ЭКОНОМИКИ::Медицина и здравоохранение |
Дата публикации: | 2020 |
Аннотация: | Объектами исследования являлись ген и белок бычьего гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ). Цели проекта: разработка и получение устойчивой генетической конструкции, несущей ген цитокина ГМ-КСФ, в составе стабильно наследуемой векторной системы бактерий; разработка дизайна и клонирование гена ГМ-КСФ в клетках E.coli, получение белка ГМ-КСФ и анализ особенностей экспрессии генетической конструкции в E. coli; изучение основных свойств белка, включая его активность. Методы исследования: микробиологические, генетические, биохимические, биоинформатические и молекулярно-биологические. В процессе исследований использованы следующие приборы: амплификатор, автоматический секвенатор, весы лабораторные аналитические, центрифуги, термостаты, холодильники, сушильные шкафы, автоклав, качалки, водяные бани, аппараты для электрофореза, магнитные мешалки, система гельдокументации, СО2-инкубатор, ламинарный шкаф, хроматограф, микроскоп, система фильтрации в тангенциальном потоке. В результате работы проведен сравнительный молекулярно-генетический и эволюционный анализ белковых и нуклеотидных последовательностей бычьего ГМ-КСФ, определены элементы гомологии, а также вариабельные участки и эволюционные дистанции. Сконструирована последовательность структурной части гена бычьего ГМ-КСФ, оптимизированная для экспрессии в клетках E. coli. Рассчитан индекс адаптации кодонов для гена бычьего ГМ-КСФ. Оптимизированная последовательность гена отсеквенирована, проведена амплификация методом ПЦР, после чего последовательность клонировали в составе вектора pET24b(+) по сайтам рестриктаз Nde I и Eco RI. Полученной конструкцией трансформированы клетки штамма E. coli XL-1 Blue. Отобраны клоны, унаследовавшие рекомбинантные плазмиды с геном бычьего ГМ-КСФ. Установлено, что созданная генетическая конструкция экспрессируется в гетерологичном хозяине E. coli. Биосинтез целевого белка приводит к его накоплению в «тельцах включения». Разработаны методики рефолдинга и очистки ГМ-КСФ из бактериальных клеток, а также методика оценки его биологической активности. |
URI документа: | https://elib.bsu.by/handle/123456789/283979 |
Регистрационный номер: | Рег. № НИР 20190529 |
Лицензия: | info:eu-repo/semantics/closedAccess |
Располагается в коллекциях: | Отчеты 2020 |
Полный текст документа:
Файл | Описание | Размер | Формат | |
---|---|---|---|---|
Отчет 20190529 Прокулевич.docx | 2,2 MB | Microsoft Word XML | Открыть |
Все документы в Электронной библиотеке защищены авторским правом, все права сохранены.