Please use this identifier to cite or link to this item:
https://elib.bsu.by/handle/123456789/239302| Title: | Клонирование кДНК глюкоамилазы Aspergillus awamori в дрожжевой интегративный экспрессионный вектор |
| Other Titles: | Cloning of cDNA glucoamylase Aspergillus awamori into yeast integrative expression vector / A. V. Kulik, O. B. Rus, A. N. Evtushenkov |
| Authors: | Кулик, Е. В. Русь, О. Б. Евтушенков, А. Н. |
| Keywords: | ЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Биология |
| Issue Date: | 2019 |
| Publisher: | Минск : БГУ |
| Citation: | Журнал Белорусского государственного университета. Биология = Journal of the Belarusian State University. Biology . - 2019. - № 3. - С. 59-66 |
| Abstract: | На основе дрожжевого вектора pKLAC2 сконструирована плазмида pKGLA-1 с кДНК глюкоамилазы гриба Aspergillus awamori 466. В результате проведенного клонирования нуклеотидной последовательности гена glaA в клетках Kluyveromyces lactis GG799 синтезируется рекомбинантный фермент с нативным N-концом. С помощью реакции амплификации целевого гена и рестрикционного анализа генетической конструкции подтверждено успешное создание плазмиды pKGLA-1. Эффективность экспрессии целевого гена в дрожжевых клетках, обусловленной интеграцией экспрессионной кассеты в область промотора LAC4 геномной ДНК вследствие гомологичной рекомбинации, доказана чашечным методом. Рекомбинантные клетки K. lactis росли на селективной минимальной среде с добавлением 5 ммоль/л ацетамида и секретировали глюкоамилазу, о чем свидетельствовали зоны гидролиза крахмала вокруг колоний. Практическое применение сконструированной плазмиды может быть реализовано при создании различных дрожжевых штаммов-продуцентов глюкоамилаз гриба A. awamori с определенными промышленно значимыми свойствами. |
| Abstract (in another language): | We constructed pKLAC2-based integrative expression plasmid pKGLA-1 with glaA gene from Aspergillus awamori 466. The PCR amplification of the target gene glaA and restriction analysis proved pKGLA-1 construction. Linearised plasmid was used for the integrative transformation of chemically competent Kluyveromyces lactis GG799 cells. Colonies of cells transformed with pKGLA-1 plasmid were selected by growth on agar plates containing 5 mmol/L acetamide. Expression of the heterologous gene in K. lactis cells was visually assessed using medium containing 2 % starch. K. lactis cells containing integrated pKGLA-1 DNA secreted recombinant protein glucoamylase with a native N-terminus. |
| URI: | http://elib.bsu.by/handle/123456789/239302 |
| ISSN: | 2521-1722 |
| DOI: | 10.33581/2521-1722-2019-3-59-66 |
| Licence: | info:eu-repo/semantics/openAccess |
| Appears in Collections: | 2019, №3 |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.