Please use this identifier to cite or link to this item:
https://elib.bsu.by/handle/123456789/121740
Title: | Рефолдинг и очистка рекомбинонтного эктодомена рецептора эфрина А5 методом гель-фильтрации |
Authors: | Бондарюк, Е. В. Паавилайнен, С. Присяжненко, О. К. Химанен, Ю.-П. Шолух, М. В. |
Keywords: | ЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Биология |
Issue Date: | 2014 |
Publisher: | Минск : БГУ |
Citation: | Труды белорусского государственного университета. Физиологические, биохимические и молекулярные основы функционирования биосистем. 2014. - Т. 9, ч. 1. - С. 129-134 |
Abstract: | Генетическая последовательность эктодомена рецептора EphА5, клонированная в плазмиду pEX32, экспрессировалась вместе с тиоредоксиновым фрагментом в штамме E.coli Origami B (DE3) в виде телец включения. Белок из телец включения солюбилизировали в растворе 8 моль/л мочевины и подвергали рефолдингу используя метод гель-фильтрации на Sephacryl S300. Данный метод позволяет использовать высокую исходную концентрацию белка (10 мг/мл) и эффективно проводить рефолдинг с одновременным отделением целевого продукта от высокомолекулярных белковых агрегатов, в тоже время, обеспечивая необходимые условия для рефолдинга: пространственную изоляцию белковых молекул друг от друга в порах сорбента и плавное снижение концентрации денатурирующего агента (мочевины). Электрофоретический анализ полученных фракций в неденатурирующих условиях продемонстрировал наличие мономерной формы эктодомена рецептора EphА5. Тиoредоксиновый фрагмент и эктодомен EphA5, полученные после протеолиза тромбином разделяли хроматографически используя Sephadex G-100. Описанная технология позволяет провести рефолдинг и получить мономерный EphA5 с чистотой не менее 90%, используя исключительно методы гель-фильтрации. |
URI: | http://elib.bsu.by/handle/123456789/121740 |
ISSN: | 2220-5896 |
Appears in Collections: | 2014 : Том 9. Часть 1. |
Files in This Item:
File | Description | Size | Format | |
---|---|---|---|---|
129-134.pdf | 428,31 kB | Adobe PDF | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.