Logo BSU

Please use this identifier to cite or link to this item: https://elib.bsu.by/handle/123456789/121740
Title: Рефолдинг и очистка рекомбинонтного эктодомена рецептора эфрина А5 методом гель-фильтрации
Authors: Бондарюк, Е. В.
Паавилайнен, С.
Присяжненко, О. К.
Химанен, Ю.-П.
Шолух, М. В.
Keywords: ЭБ БГУ::ЕСТЕСТВЕННЫЕ И ТОЧНЫЕ НАУКИ::Биология
Issue Date: 2014
Publisher: Минск : БГУ
Citation: Труды белорусского государственного университета. Физиологические, биохимические и молекулярные основы функционирования биосистем. 2014. - Т. 9, ч. 1. - С. 129-134
Abstract: Генетическая последовательность эктодомена рецептора EphА5, клонированная в плазмиду pEX32, экспрессировалась вместе с тиоредоксиновым фрагментом в штамме E.coli Origami B (DE3) в виде телец включения. Белок из телец включения солюбилизировали в растворе 8 моль/л мочевины и подвергали рефолдингу используя метод гель-фильтрации на Sephacryl S300. Данный метод позволяет использовать высокую исходную концентрацию белка (10 мг/мл) и эффективно проводить рефолдинг с одновременным отделением целевого продукта от высокомолекулярных белковых агрегатов, в тоже время, обеспечивая необходимые условия для рефолдинга: пространственную изоляцию белковых молекул друг от друга в порах сорбента и плавное снижение концентрации денатурирующего агента (мочевины). Электрофоретический анализ полученных фракций в неденатурирующих условиях продемонстрировал наличие мономерной формы эктодомена рецептора EphА5. Тиoредоксиновый фрагмент и эктодомен EphA5, полученные после протеолиза тромбином разделяли хроматографически используя Sephadex G-100. Описанная технология позволяет провести рефолдинг и получить мономерный EphA5 с чистотой не менее 90%, используя исключительно методы гель-фильтрации.
URI: http://elib.bsu.by/handle/123456789/121740
ISSN: 2220-5896
Appears in Collections:2014 : Том 9. Часть 1.

Files in This Item:
File Description SizeFormat 
129-134.pdf428,31 kBAdobe PDFView/Open


PlumX

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.