Please use this identifier to cite or link to this item:
https://elib.bsu.by/handle/123456789/92014
Title: | Получение инсулин-продуцирующих мезенхимальных стволовых клеток человека путем генетической модификации : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / руководитель темы В. В. Гринев |
Authors: | Гринев, В. В. Романовская, Т. В. Кучко, Л. С. Гринева, И. А. Костогладова, Е. Э. Ильюшенок, И. Н. Кирсанова, О. Д. Шульга, А. О. |
Keywords: | ЭБ БГУ::ТЕХНИЧЕСКИЕ И ПРИКЛАДНЫЕ НАУКИ. ОТРАСЛИ ЭКОНОМИКИ::Биотехнология |
Issue Date: | 2014 |
Publisher: | Минск : БГУ |
Abstract: | Объект исследования: лентивирусные векторы для переноса тканеспецифических генов поджелудочной железы в МСК человека. Цель исследования: получить инсулин-продуцирующие мезенхимальные стволовые клетки человека путем генетической модификации. Методы исследования: выделение, рестрикция, лигирование, секвенирование и электрофорез нуклеиновых кислот, полимеразная цепная реакция (ПЦР), трансформация бактерий, получение рекомбинантных лентивирусов, получение и культивирование МСК, лентивирусная трансдукция, проточная цитометрия, вестерн-блоттинг. Использованные приборы: cпектрофотометр Cary 50, термоциклер ThermoHybaid Px2, секвенатор ALFexpressTM II, амплификатор Chromo4, система для белкового гель-электрофореза Mini-Protean® Tetra Cell, система для белкового переноса Mini Trans-Blot® Electrophoretic Transfer Cell, проточный цитофлуориметр FACScan. Основные результаты: В результате проведенной работы получены кДНК генов тканеспецифичных транскрипционных факторов бета-клеток поджелудочной железы PDX1 и NEUROG1. Эти гены использованы для клонирования в составе векторов pHR-Pdx1 и pHR-NEUROG3, которые использованы для получения трансдуцирующих рекомбинантных трансдуцирующих лентивирусных частиц. Была проведена трансдукция мезенхимальных клеток костного мозга (МСК КМ) человека и анализ индуцируемых генной модификацией изменений в характере экспрессии других тканеспецифических генов. Результаты анализов указывают на невысокий уровень индуцируемой дифференцировки клеток при использовании данного подхода и невозможность получения при данном подходе глюкозорегулируемой экспрессии аутологичного гена инсулина. Также были разработаны и сконструированы вектора pHR-PEgr1-PPI, pHR- PEgr1-SCI и pHR-PEgr1-Fur_PPI, использованые для получения трансдуцирующих рекомбинантных лентивирусных частиц для переноса в МСК КМ человека гена природного инсулина человека либо его модифицированных вариантов под контролем глюкозорегулируемого промотора гена Egr1 человека. После трансдукции в генномодифицированных клетках наблюдалась экспрессия гена инсулина, причем количество транскриптов гена быстро повышалось в 4-5 раз при добавлении в среду повышенной концентрации глюкозы, а затем постепенно снижалась до исходного уровня в течение 30 мин. Области применения: клеточная молекулярная биология, экспериментальная генная терапия, трансплантология. |
URI: | http://elib.bsu.by/handle/123456789/92014 |
Registration number: | № госрегистрации 20111940 |
Appears in Collections: | Отчеты 2014 |
Files in This Item:
File | Description | Size | Format | |
---|---|---|---|---|
Отчет 20111940 Гринев.doc | 4,93 MB | Microsoft Word | View/Open |
Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.