Регистрация бромирующей активности миелопероксидазы с помощью флуоресцеина

Abstract

Исследовано изменение спектрально-люминесцентных свойств флуоресцеина после его взаимодействия с различными активными формами кислорода и галогенов (О2•–, H2O2, HOCl, HOBr, HOSCN, N-хлорамин и N-бромамин таурина), а также в системе миелопероксидаза (МПО)-Н2О2-Cl–/Br–/SCN–. Установлено, что после взаимодействия исключительно с HOBr, а также в системе МПО-Н2О2-Br– флуоресцеин превращается в соединение с максимумом поглощения на 518 нм. Максимум флуоресценции данного соединения регистрируется на длине волны 540 нм при возбуждении на 520 нм, что соответствует характеристикам бромированного флуоресцеина – эозина Y. Подобраны оптимальные условия (фосфатно-солевой буфер (рН 7.4), содержащий 137 мМ NaCl, 5 мкМ флуоресцеина, 15-30 мМ NaBr и 25-50 мкМ Н2О2) для регистрации образования в растворе HOBr, на основании чего предлагается качественный метод определения бромирующей активности МПО in vitro. С использованием разработанного метода исследовано влияние физиологических и искусственно синтезированных ингибиторов, а также скэвенджеров активных форм кислорода и галогенов на бромирующую активность МПО. На основании полученных данных установлено, что флуоресцеин представляет собой перспективное соединение для разработки на его основе флуоресцентного метода регистрации бромирующей активности гемсодержащих пероксидаз млекопитающих.

Ключевые слова: миелопероксидаза, флуоресцеин, эозин Y, бромноватистая кислота, бромирующая активность