Разработка флуориметрического метода гистохимического определения эфриновых рецепторов, основанного на лигандрецепторном взаимодействии ГПНИ «Фундаментальные и прикладные науки – медицине», подпрограмма «Медицина и фармация». Задание 1.22. : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель М. В. Шолух

Abstract

Объект исследования, или разработки: конъюгат эфрин А5- флуоресцентный краситель Cy3. Цель работы: создание высокочувствительного флуориметрического метода гистохимического определения эфриновых рецепторов в нормальных и опухолевых тканях. Методы, или методология проведения работы: молекулярно-биологические, хроматографические, спектрофотометрические, спектро-флуориметрические, гравиметрические. Результаты проекта и их новизна: разработаны новые методические подходы, позволяющие значительно повысить выход рекомбинантного эфрина-А5 и эктодомена эфринового рецептора EphA5 из телец включения E.coli за счет рефолддинга эфрина на хроматографической матрице. Белки очищены до гомогенного состояния сочетанием металл-хелатной хроматографии и гель-фильтрации. Получены конъюгаты эфрина А5 с флуоресцентными красителями Cy3, Сy5 и флуоресцеином. Эктодомен эфринового рецептора А5 модифицирован красителем Cy3. Взаимодействие эфрина-А5 с ECD EphA5 подтверждено методом FRET анализа. Обработка срезов карциномы предстательной железы конъюгатом эфринА5-Су3 выявила места специфического связывания лиганда с рецептором, проявившиеся в виде ярко красно-оранжевых пятен на темно красном фоне.