Создание секреторного вектора на основе лидерной последовательности гена целлюлазы Erwinia chrysanthemi

Abstract

New secretion vector containing the Erwinia chrysanthemi cellulase signal sequence was constructed for the periplasmic localization of recombinant proteins in Gram negative bacteria. The gene encoding xylose isomerase from Arthrobacter nicotianae was cloned in secretion vector containing cellulase promoter and expressed in E. coli BL21 (DE3) cells. Periplasmic production of the active recombinant enzyme implies the recognition of the cellulase signal peptide by E. coli secretory system. This study recommends the use of this signal peptide for periplasmic production of other foreign proteins in E. = Проведено конструирование вектора секреции на основе лидерной последовательности гена целлюлазы Erwinia chrysanthemi для экспорта рекомбинантных белков из цитоплазмы в периплазматическое пространство грамотрицательных бактерий. Проведено клонирование в данный вектор структурного гена ксилозоизомеразы (ху/А) из Arthrobacter nicotianae с целью изучения функционирования созданного вектора секреции pLD. Пока­зано, что в клетках Е. соli происходит конститутивная экспрессия гена хуІА, находящегося в составе плазмиды pLDxy/A, с образованием биологически активного продукта. Активность ксилозоизомеразы регистрировалась как в цитоплазме, так и в периплазме клеток бактерий Е. соli BL21 (DE3). Наличие активности ксилозоизомера­зы в периплазме указывает на то, что секреторная система бактерий Е. coli BL21 (DE3) распознает лидерный пептид целлюлазы Ech ENA49 и направляет синтезированную ксилозоизомеразу в периплазму.