Оптимизация методики проведения сайт-направленного мутагенеза с использованием плазмиды pK18mob для бактерий рода Pseudomonas

Abstract

В результате исследования разработана методика сайт-направленного инсерционного мутагенеза с использованием суицидального интегративного вектора pK18mob для бактерий рода Pseudomonas. Показано, что опти-мальное соотношение клеток донора и реципиента составляет 50 : 50. Вместе с тем у бактерий P. chlororaphis, а также их подвидов наблюдается смещение оптимального соотношения в сторону преобладания клеток донора. Использование данной методики позволяет увеличить выход трансконъюгантов более чем в четыре раза, что существенно расширяет возможности по поиску и отбору интересующих исследователя вариантов штаммов. Установлено, что коллекционные штаммы бактерий рода Pseudomonas обладают различными скоростями роста. Продемонстрировано, что в геномах всех исследованных штаммов присутствует ген psrA. = In the course of this study, a method for site-directed insertional mutagenesis was developed using the pK18mob suicide integral vector for bacteria of the genus Pseudomonas. It is shown that the optimal ratio of donor and recipient cells is 50 : 50. At the same time, in bacteria of P. chlororaphis, as well as their subspecies, the optimal ratio is shifted towards the predominance of donor cells. The use of this technique allows to increase the yield of transconjugants more than 4 times, which significantly expands the possibilities for searching and selecting the variants of strains of interest to the researcher. It was also found that the collection strains of bacteria of the genus Pseudomonas have different growth rates. It was demonstrated that the gene psrA is present in the genomes of all strains studied.