Получение штаммов Bacillus Subtilis – продуцентов термостабильных альфа-амилаз : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель Ю. В. Селезнёва

Abstract

Объектом исследования являлись бактерии рода Bacillus . Целью работы является получение бактериальных штаммов-продуцентов термостабильных α-амилаз. Работа была выполнена с использованием методов микробиологии, биохимии, молекулярного клонирования и молекулярно-генетического анализа. В результате исследований в случайные участки хромосомной ДНК штамма Bacillus subtilis 168 были введены копии гена amyM3, обеспечивающие экспрессию мутантной термостабильной α-амилазы штамма Bacillus sp. 406. Были получены рекомбинантные бактерии Bacillus subtilis 168-1, которые обеспечивали синтез и секрецию в культуральную жидкость чужеродного фермента молекулярной массой 53 кДа. Через 3 суток культивирования бактерий штамма Bacillus subtilis 168-1 в жидкой питательной среде накапливалась термостабильная α-амилаза в количестве 61,9 ед. на 1 мл, что в 18 раз превышает продуктивность исходного штамма. Был подобран состав питательной среды для глубинного выращивания рекомбинантных бактерий B. subtilis 168-1. Активность α амилаз через 120 ч культивирования штамма в улучшенной питательной среде составила 784,8 ед./мл. Путём химического мутагенеза рекомбинантного штамма B. subtilis 168-1 был получен штамм B. subtilis b11, после культивирования которого активность α-амилаз в среде культивирования составила 961,1 ед./мл. Дальнейшая модификация штаммов Bacillus subtilis 168-1 и Bacillus subtilis b11 позволит получить штамм-продуцент термостабильных α амилаз. Создание и внедрение штамма бактерий Bacillus subtilis, продуцирующего α амилазу, обеспечит производство амилолитических препаратов, востребованных в пищевой и сельскохозяйственной промышленности. Выпуск отечественных препаратов α-амилазы необходим с целью замещения зарубежных ферментов, снижения затрат на производство продукции.