Конструирование вариантов бактериального гена aroA со сниженной чувствительносью к гербициду глифосату

Abstract

Глифосат является гербицидом широкого спектра действия, наиболее широко применяемым в данное время. Механизм действия глифосата основан на специфическом и эффективном ингибировании 5-енолпирувилшикимат-3-фосфатсинтазы (EPSPS) – ключевого фермента биосинтетиза ароматических соединений у бактериальных и растительных организмов. Низкая токсичность глифосата для животных, в том числе и человека, обусловлена отсутствием у них пути биосинтеза ароматических соединений, ингибируемого этим гербицидом. Одним из подходов к созданию трансгенных растений является введение в их геном бактериальных генов aroA со сниженной чувствительностью к глифосату. Нами осуществлена амплификация и клонирование гена aroA из нескольких видов энтеробактерий, что позволило нам отобрать наиболее перспективные варианты генов aroA (из E. coli и D.dadantii) в отношении устойчивости их продуктов к ингибированию глифосатом. Последующее использование метода сайт-направленного мутагенеза позволило нам отобрать варианты генов с пониженной примерно в 40 раз чувствительностью к глифосату.