Создание продуцента глюкоамилазы на основе штамма мицелиального гриба Aspergillus awamori : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / научный руководитель А. Н. Евтушенков

Abstract

Объектом исследования являются штаммы мицелиальных грибов Aspergillus awamori. Цель работы: создание нового продуцента технического фермента глюкоамилазы

мицелиального гриба Aspergillus awamori. Основными использованными методами были:

индуцированный мутагенез, количественная характеристика ферментативной активности,

электрофорез нативный и в денатурирующих условиях. В результате многоступенчатой генетической селекции с применением алкилирующего

мутагена N-метил-N-нитро-N-нитрозогуанидина получен ряд мутантных вариантов с

повышенной способностью гидролизовать крахмал, среди которых наиболее активным

является A. awamori 1/3а. Штамм обладает глюкоамилазной активностью, уровень которой

после 120 ч культивирования с активным перемешиванием при 28 оС в среде, содержащей

24 % пшеничной муки, осахаренной солодовым молоком, составляет (262,8±18,3) ед./мл, а

в среде на основе 24 % ржаных отрубей – (265,0±25,2) ед./мл, что приблизительно на 300

% больше в сравнении с активностью исходного штамма A. awamori 466. Изучены культурально-морфологические свойства мутанта при выращивании на различных

агаризованных питательных средах и способность утилизировать различные источники

углерода. Синтез глюкоамилазы A. awamori 1/3а резистентен к катаболитной репрессии

глюкозой. Посредством электрофоретического разделения и получения зимограмм в культуральной

жидкости A. awamori 1/3а обнаружены белки массой 114 и 63 кДа с глюкоамилазной

активностью и белок размером 51 кДа, обладающий α-амилазной активностью.

Глюкоамилаза A. awamori 1/3а обнаруживает активность в широком диапазоне рН, с

оптимум 4,4-5,5 и сохраняет стабильность при 4 оС не менее чем в течение 48 ч в

буферных растворах с рН 4,5-6,0. Оптимальной для работы фермента является

температура 60 оС. Подобраны оптимальные условия культивирования A. awamori 1/3а,

обеспечивающие максимальный выход фермента глюкоамилазы.