Направленный инсерционный мутагенез структурных генов биотенового оперона у бактерии вида BACILLUS SUBTILIS

Abstract

We have constructed two kinds of vectors for the rapid inactivation of chomosomal genes of the biotin operon in the cells of Bacillus subtilis, by means of insertional mutagenesis through double crossing over and integration into the chromosome by Campbell-type recombination. The above-mentioned hybrid plasmids containing mutations in the genes bioF and bioB were first constructed in E. coli and then used for the inactivation of these genes in the cells of B. subtilis. = На основе широко распространенных векторов грамотрицательных бактерий E. coli – плазмид pUC18 и pMTL21C путем введения в их состав фрагментов хромосомы грамположительных бактерий B. subtilis созданы высокоэффективные структуры, пригодные для проведения направленного мутагенеза B. subtilis. Мутагенез можно осуществлять путем рекомбинационной замены интактного гена на инактивированный in vitro (плазмида pUC18 – pВioB1) либо за счет интеграции целостного вектора в заданный участок хромосомы B. subtilis (плазмида pMTL21C – pВioF2). Применение метода рекомбинационного мутагенеза с помощью сконструированных плазмид дало возможность получить мутантов по структурным генам биотинового оперона бактерий вида B. subtilis. Такой подход можно использовать для индукции мутаций в любых генах грамположительных бактерий.