Характеристика гена куриного лейкоцитарного α-интерферона и влияние структуры гена на его экспрессию в клетках Escherichia coli

Abstract

Chicken interferon alpha gene was isolated from the whole-blood DNA, sequenced, and cloned into expression vector pET24b(+) and recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli strain BL21 (λDE3). Induction with IPTG results in accumulation of the protein, having the same molecular weight as chicken interferon alpha. Effectiveness of eukaryotic gene expression in bacterial cells depends on different factors, first of all on the nucleotide composition of this gene. We showed, that codon usage frequency influences on the accumulation level of the protein with molecular mass equals to chicken interferon alpha in E. coli cells. = Ген куриного лейкоцитарного α-интерферона амплифицирован с помощью ПЦР с использованием сконструированных специфических праймеров на матрице ДНК, выделенной из куриной крови. Нуклеотидная последовательность амплифицированного фрагмента подтверждена с помощью секвенирования, затем продукт амплификации встроили в вектор экспрессии pET24b(+). После индукции ИПТГ наблюдалось образование в клетках E. coli белка, соответствующего по молекулярной массе куриному лейкоцитарному α-интерферону. Показано влияние различия в частоте встречаемости синонимических аминокислотных кодонов в клетках про- и эукариот на уровень накопления в бактериальных клетках белка, соответствующего по размеру белку куриного лейкоцитарного α-интерферона.