Влияние белков-шаперонов на продукцию бычьего альфа-интерферона в бактериях Escherichia coli : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель К. В. Кудин

Abstract

Объекты исследования: бактерии–продуценты бычьего альфа–интерферона E. coli. Цель задания: разработка способов, позволяющих повысить продукцию бычьего альфа–интерферона (cowIFNα) в растворимой форме в клетках E. coli за счет сверхэкспрессии белков шаперонов DnaK, DnaJ, GrpE, ClpB и GroELS нативного и чужеродного происхождения. Методы исследования: микробиологические, молекулярно–генетические, физиолого–биохимические и биоинформатические. В результате исследования установлено, что присутствие дополнительных копий генов, кодирующих шапероны DnaK, DnaJ, GroEL, GroES, ClpB нативного происхождения в клетках бактерий E. coli, приводит к увеличению отношения концентрации бычьего альфа-интерферона в растворимой фракции к нерастворимой. Присутствие дополнительной детерминанты чужеродного происхождения groEL2 бактерий R. pyridinivorans 5Ap в клетках продуцента бычьего альфа-интерферона E. coli увеличивает стабильность интерферона в 8 раз при хранении в течение 2–3 недель при температуре 4 °С. Установлено, что количество бычьего α-интерферона в штаммах-продуцентах бактерий E. coli не зависит от вносимого количества индуктора, и оптимальным температурным режимом для получения растворимой формы целевого белка является температура +20 °С. Оптимизированы условия очистки растворимого бычьего альфа-интерферона с помощью катионообменной хроматографией, что позволяют получить целевой белок высокой степени чистоты и обладающий биологической активностью.