Исследование ключевых регуляторов вирулентности Pectobacterium carotovorum : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель Е. А. Николайчик

Abstract

Объектами настоящей работы являются способы регуляции вирулентности бактерий Pectobactrium versatile и P. atrosepticum. Цель проекта – исследование регуляции вирулентности бактерий P. versatile и P. atrosepticum. транскрипционными факторами. Исследование выполнялась современными молекулярно-биологическими методами, включая ПЦР, молекулярное клонирование, анализ in silico. Ключевым методическим подходом, наиболее критичным для выполнения работы, было использование современных методов биоинформатики для отбора наиболее подходящих для дальнейшей работы генов транскрипционных факторов, дифференциально экспрессирующихся при развитии заболевания. В результате выполненной работы с помощью анализа транскриптомных данных в геноме P. atrosepticum SCRI1043 идентифицирован ген ECA0427 транскрипционного фактора, дифференциально экспрессирующегося в ходе инфекции растения этим патогеном, с помощью анализа in silico в геноме P. versatile JN42 идентифицирован ортолог гена ECA0427 OA04_04850. С помощью анализа in silico построен профиль сайтов связывания транскрипционного регулятора OA04_04850 и идентифицированы его предполагаемые сайты связывания в геноме P. versatile JN42. Обнаруженные гены клонированы в высококопийный и низкокопийный вектор, корректность полученных конструкций подтверждена секвенированием. У полученных с помощью высококопийной конструкции производных штамма P. versatile JN42 с pUC18:: OA04_04850 зафиксировано повышение продукции экзоферментов b повышение скорости роста культуры клеток. В специализированный суицидальный вектор pJP5603 клонирован фрагмент гена OA04_04850, с помощью этой конструкции были получены и верифицированы мутанты P. versatile JN42, дефектные по гену OA04_04850. Фенотип мутантов пока установить не удалось.