Получение антител против альбумина человека, модифицированного при галогенирующем стрессе, исследование их биологической активности in vitro и возможности диагностического применения : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель Д. В. Григорьева

Abstract

Объектом исследования являются нейтрофилы крови человека. Цели работы: получение специфических антител против модифицированного гипогалоидными кислотами сывороточного альбумина человека (САЧ), установление механизмов их действия на функциональные ответы нейтрофилов, активированных галогенированным САЧ, а также разработка на их основе методов выявления в плазме крови галогенированных белков как маркеров наличия воспалительного процесса. Основными методами исследования являются центрифугирование, спектрофотометрия, спектрофлуориметрия, лазерная конфокальная микроскопия, проточная цитометрия, спектроскопия гигантского комбинационного рассеяния. Установлено, что антитела против САЧ-Cl, продуцируемые гибридомами клонов 2Е6, 1Н2 и 3Е2, ингибируют респираторный взрыв и экзоцитоз миелопероксидазы из нейтрофилов, активированных САЧ-Cl. Наиболее эффективными оказались антитела клона 1Н2: так, образуя комплекс с САЧ-Cl, данные антитела препятствуют САЧ-Cl-инициируемому изменению морфологии клеточной поверхности и реорганизации актиновой составляющей цитоскелета нейтрофилов. Антитела, полученные от гибридом клонов 2С3, 3D7 и 3Е6, не только не отменяли эффект САЧ-Cl на нейтрофилы, но и усиливали его. Впервые показано, что галогенированный САЧ запускает быстрый нетоз нейтрофилов, однако при этом вызывает разрушение нейтрофильных внеклеточных ловушек предположительно за счет высвобождения гистонов из белок-нуклеотидных наноструктур. Антитела клона 1Н2 эффективно ингибируют САЧ-Cl-активируемый быстрый нетоз, в то время как остальные клоны антител усиливают образование нейтрофильных внеклеточных ловушек. Таким образом, можно заключить, что антитела, полученные от гибридом клонов 2С3, 3D7 и 3Е6, вполне пригодны для применения в иммуноферментном анализе при детекции модифицированного САЧ в биологических жидкостях, а антитела, продуцируемые гибридомами классов 2Е6, 1Н2 и 3Е2, кроме того, могут быть использованы и для создания на их основе лекарственных средств, предназначенных для регуляции течения воспалительной реакции организма.