Разработать и внедрить технологию производства антивирусного иммуномодулирующего биопрепарата на основе овечьего рекомбинантного интерферона : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель В. А. Прокулевич

Abstract

Объектом исследований являлся овечий интерферон. Цели работы: создать и внедрить технологию производства антивирусного иммуномодулирующего биопрепарата на основе рекомбинантного овечьего интерферона; изучить безвредность биопрепарата на овцах; подобрать оптимальные терапевтические и профилактические дозы, концентрации биопрепарата для овец; разработать проект инструкции по применению; произвести установочную партию препарата. Методы исследования: микробиологические, биоинформатические и молекулярно-биологические, биохимические. В процессе исследований использованы следующие приборы: аппараты для вертикального и горизонтального гель-электрофореза, аппарат для анализа гелей, амплификатор, весы лабораторные аналитические, центрифуги, термостаты, холодильники, сушильные шкафы, автоклав, качалки, водяные бани, ферментер, спектрофотометр. В результате была изучена эпизоотическая ситуация по инфекционным заболеваниям овец в Республике Беларусь и мире; разработан дизайн гена овечьего интерферона-α, адаптированного к экспрессии в бактериях E. coli; получен штамм-продуцент овечьего интерферона на основе рекомбинантной плазмиды, содержащей экспрессионный ген овечьего интерферона-α.; изучены особенности экспрессии овечьего интерферона в лабораторных условиях; разработан протокол солюбилизации, рефолдинга и хроматографической очистки белка; наработан лабораторный образец белка и исследован по основным параметрам; определено состояние клеточного иммунитета у овец в норме и при применении белка; разработан лабораторный регламент получения субстанции овечьего интерферона ЛР ФДБИ 103-2018; создана препаративная форма препарата. Исследование опытной партии препарата, предоставленного для испытаний на параметры токсичности, показало, что применение опытной партии овечьего интерферона рекомбинантного овцам в дозе 5 мл/кг (5-ти кратная терапевтическая доза) является безвредной для овец. Использование иммуностимулирующего препарата «Биферон-МРС» для лечения заболеваний вирусной и вирусно-бактериальной этиологии увеличивает эффективность лечения на 15 % (с 63 % до 78 %), сохранность увеличивается на 8 % (с 85,7 % до 93,75 %); разработан проект ТУ (TУ BY 100235722.247-2018) на производство антивирусного иммуномодулирующего препарата на основе рекомбинантного овечьего интерферона; отработаны параметры технологического процесса изготовления биопрепарата на производстве. Действующие компоненты получают с помощью метода, основанного на технологии рекомбинантной ДНК, используя клетки бактерий в качестве хозяина. Субстанции интерферонов получают в условиях, позволяющих минимизировать микробную контаминацию продукта. Произведена установочная и опытная партии препарата «Биферон-МРС» в суммарном количестве 500 доз. Препарат по физико-химическим и биологическим показателям соответствует установленным требованиям. Область применения: биотехнологические производства фармацевтических субстанций и препаратов.