Влияние наночастиц диоксида титана на рефолдинг рекомбинантного эфрина-А5 : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель А. В. Жидецкий

Abstract

Объектом исследования является рекомбинантный эфрин-А5. Цели работы - выделение, очистка, разработка методики рефолдинга рекомбинантного эфрина-А5 из телец включения E.coli, а также изучение взаимодействия и влияния наночастиц диоксида титана TiO2 на ренатурацию данного белка. Основными методами явились спектрофотометрические, флуориметрические, электрофоретические, хроматографические, метод динамического светорассеяния, рефолдинг разведением и на матрице Ni сефарозы. В результате проделанной работы установлены оптимальные условия очистки телец включения и экстракции из них целевого продукта; определены основные параметры проведения металл-хелатной хроматографии на Ni-сефарозе для получения относительно гомогенной фракции с чистотой рекомбинантного эфрина-А5 около 70 %; при скрининге основных характеристик рефолдинг буфера установлены их оптимальные значения для получения нативной мономерной формы белка; проведен рефолдинг целевого белка на матрице Ni-сефарозы; получены и охарактеризованы водные суспензии нативных и модифицированных декстрансульфатом (ДС) и полиэтиленимином (ПЭИ) наночастиц диоксида титана TiO2 (НЧ-TiO2); изучено взаимодействие нативных и модифицированных НЧ-TiO2 как в свободном, так и в иммобилизованном на NTA-сефарозе виде, с рекомбинантным эфрином-А5 в развернутом состоянии. Применение НЧ для рефолдинга рекомбинантного эфрина-А5 показало, что одноименно заряженные НЧ (не покрытые и модифицированные ДС) не влияют на протекание данного процесса, в то время как положительно заряженные НЧ (покрытые ПЭИ) приводят к агрегации и преципитации эфрина-А5. Флуоресцентная спектроскопия показала различие в структуре ренатурированного на матрице Ni-сефарозы эфрина-А5 и вторично развернутой молекулы белка. Полученные результаты являются новыми и могут быть апробированы для разработки методики получения других терапевтических и научно значимых рекомбинантных белков. Область применения полученных результатов – биохимия, (нано)биотехнология, биоинженерия.