Провести биоаналитический и биостатистический этапы испытания лекарственных средств кандесартан-НАН, таблетки 32 мг, производства государственного предприятия «Академфарм» : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель И. В. Семак

Abstract

Объект исследования: валидация методики кандесартана в сыворотке крови при испытаниях биоэквивалентности. Цель исследования: разработка оптимальной методики твердофазной экстракции и подбор условий для проведения высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией для количественного определения кандесартана в сыворотке крови. Основными методами исследований являются твердофазная экстракция, высокоэффективная жидкостная хроматография, масс-спектрометрия, биостатистика. Результаты работы: - подобран фармакологический аналог в качестве внутреннего стандарта – кандесартана; - подобран сорбент для проведения твердофазной экстракции: сорбент Chromabond С-8 – химически модифицированный кремнезем с привитыми октильными группами (Macherey-Nagel, Германия). - подобрана хроматографическая колонка NucleodurC18-Pyramid компании Macherey-Nagel, Германия с эффективным хроматографическим разделением, обеспечивающим высокую чувствительность (нижняя граница определяемых концентраций 1,0 нг/мл), быстроту выполнения (время анализа около 3 мин) и селективность определения; - сделаны следующие выводы: методика характеризуется доказанной селективностью (отсутствие значимого влияния матрицы, переноса пробы, других лекарственных и эндогенных веществ на результаты количественного определения кандесартана), широким линейным диапазоном определяемых концентраций (y=(0,0076±0,0001)·x; r=1,000 для диапазона 1,00 – 500 нг/мл, относительное стандартное отклонение углового коэффициента в один день составило 0,044). Предел определения составил 1,000 мкг/мл (процентная мера правильности 101%, относительное стандартное отклонение 0,082 (n=40, Р=0,95, данные получены в разные дни), предел обнаружения, рассчитанный по 3σ-критерию равен 0,2 нг/мл. Процентная мера правильности для всего диапазона применения методики при проведении измерений в один день составила 97-105% (относительная величина систематической погрешности (δ) составляет от минус 3,5 до плюс 5,0%), в разные дни – 96-101% (δ от -3,5 до +0,7%). Правильность методики для всего линейного диапазона доказана при помощи расчетов t-критерия. Повторяемость характеризуется величиной относительного стандартного отклонения Sr = 0,025 – 0,077, промежуточная прецизионность - Sr = 0,044 – 0,087. Установлена стабильность стандартных (10 суток при +4С), рабочих (3 суток при +4С). Испытана стабильность образцов при замораживании/размораживании (3 цикла, процентная мера правильности (R) составляет (96±5) % (градуировочные растворы) и 99-104%, δ= -0,6 - +4,3% для контрольных образцов), при хранении градуировочных биопроб в течение 12 часов при комнатной температуре (R=(96±5) %), а также доказана устойчивость подготовленных образцов при хранении их при +4С в устройстве для ввода образцов (не менее 48 часов, R = (100±5) %, Sr=0,060). Стабильность испытуемых образцов доказана также повторными испытаниями биопроб. Разработанная методика характеризуется удовлетворительной робастностью (устойчивостью) при проведении измерений в разные дни. Доказана правильность и прецизионность методики (устойчивость) при работе с «нестандартной» сывороткой (сыворотка с значительным содержанием липидов и сыворотка крови с выраженным гемолизом). Методика валидирована в рамках протокола валидации в полном объеме и может быть использована при проведении испытаний биоэквивалености лекарственных средств, содержащих сложные эфиры кандесартана.