Разработка общей концепции регулируемой инактивации гена шикиматкиназы для модификации шикиматного пути у бактерий Bacillus subtilis

Abstract

Показана возможность трансформации штаммов B. subtilis, перспективных для создания штаммов-продуцентов шикимовой кислоты. Получены исходные ампликоны для создания генетических конструкций, предназначенных для интеграции в состав бактериальной хромосомы. Среди ампликонов выявлен генетический полиморфизм, который может являться следствием мутагенеза, используемого при получении штаммов – продуцентов триптофана. На основе метода полимеразной цепной реакции разработана система для быстрого скрининга трансформантов на наличие рекомбинационных перестроек генома и интегративной конструкции в составе бактериальной хромосомы трансформированного штамма. = In this work demonstrated the possibility of the transformation strains of B. subtilis used to create strains-producers of shikimic acid. For 6 strains of B. subtilis, with the ability to increased synthesis of tryptophan, produced amplicons region of the genome containing genes tmrB and aroI. RFLP-analysis of the received amplicons showed their genetic polymorphism, which may be the result of mutagenesis used when receiving strains-producers of tryptophan. Based on the PCR method designed a system for fast screening of transformants for the presence of recombination and genome rearrangements presence integrative structure comprising bacterial strains used chromosomes from transformants.