Разработка и проверка функционирования генетических конструкций для ДНК-вакцины против цирковируса свиней типа 2

Abstract

Разработан дизайн двух генетических конструкций, которые могут стать основой для создания ДНК-вакцины против цирковируса свиней типа 2. Эти конструкции получены на базе коммерческого плазмидного вектора pVAX 1, одна из них содержит полноразмерную природную открытую рамку считывания капсидного белка цирковируса, а вторая – открытую рамку считывания, соответствующую белку без первых тридцати N-концевых аминокислот. Для амплификации необходимых фрагментов вирусного белка были разработаны соответствующие праймеры. Экспрессию целевых последовательностей выявляли по наличию капсидного белка вируса в культуре трансфицированных клеток млекопитающих. Предварительная оценка возможности кальций-фосфатной трансфекции перевиваемых клеток эпителия эмбриона свиньи позволила установить нецелесообразность ее использования для дальнейших исследований разработанных генетических конструкций. Результаты экспериментов показали, что белок капсида цирковируса свиней типа 2 присутствует в лизатах трансфицированных клеток в низких количествах, при этом содержание укороченного варианта белка выше, чем нативного. = In this research a design of two genetic constructions which may be used for creation of DNA vaccine for porcine circovirus type 2 (PCV-2) was developed. This constructions were derived from commercial plasmid vector pVAX 1, one of them contains full-size natural open reading frame of circovirus capsid protein and the second contains an open reading frame corresponding to a protein without the first thirty N-terminal amino acids. The appropriate primers for amplification of the necessary viral protein fragments were developed. Expression of the target sequences was detected by the presence of the virus capsid protein in the culture of transfected mammalian cells. Preliminary possibility of calcium-phosphate transfection of the porcine cell line SPEV was assessed. The obtained results showed that this approach is inexpedient for further studies of target genetic constructs. The results of the experiments showed that the circovirus capsid protein is present in the lysates of transfected cells in low amounts, while the content of the truncated variant of the protein is higher than the native one.