Молекулярно-генетический анализ гена экстрацитоплазматического сигма70-фактора и исследование его влияния на синтез антибиотиков у ризосферных бактерий : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель И. Н. Феклистова

Abstract

Объектом исследования являлись бактерии рода Pseudomonas, способные к синтезу антагонистических соединений. Целью задания являлся молекулярно-генетический анализ гена экстрацитоплазматического сигма70-фактора и исследование его влияния на синтез антибиотиков у ризосферных бактерий. Основными методами исследования являются: методы молекулярной генетики и генной инженерии, микробиологические методы, биохимические, включая хроматографию, спектрофотометрию. В процессе исследований были использованы следующие приборы: весы лабораторные аналитические, центрифуги, термостаты, холодильники, сушильные шкафы, автоклав, качалки, спектрофотометры. В результате осуществлен синтез нуклеотидной последовательности длинной 800 п.о., соответствующей гену pfrI, с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) на матрице хромосомной ДНК P. putida М8. Осуществлена трансформация клеток бактерий E.coli DH5α рекомбинантной плазмидой pUC19 pfrI. Установлено, что полученный фрагмент гомологичен генам, детерминирующим синтез сигма-24 подкласса σ70-факторов с экстрацитоплазматической функцией. pfrI-ген был перенесен в челночную мультикопийную плазмиду широкого круга хозяев pAYC31. Мультикопийная плазмида pAYC31pfrI была перенесена в клетки бактерий P. putida, где конструкция успешно поддерживается и реплицируется. Осущетсвлен перенос мультикопийной плазмиды pAYC31pfrI в клетки P. chlororaphis 449, P. aurantiaca B-162, P. chlororaphis 139, в результате чего получены продуценты антибиотиков феназинового ряда.