Молекулярно-видовая диагностика труднодифференцируемых форм фитофагов-вредителей культивируемых растений в Беларуси: разработка и использование ПЦР-ПДРФ ключей : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ ; научный руководитель Н. В. Воронова

Abstract

Объектом исследования являются тли видов Aphis pomi и Aphis spiraecola, развивающиеся в условиях Беларуси на разных кормовых растениях. Предмет исследования – нуклеотидные последовательности гена COI (баркод-регион) как потенциальный маркер для разработки идентификационных ПЦР-ПДРФ таблиц. Цель работы – построение ПДРФ-таблиц для молекулярно-видовой диагностики некоторых труднодифференцируемых форм тлей фауны Беларуси, и молекулярно-видовая диагностика тлей комплекса A. pomi / A. spiraecola, развивающихся в условиях Беларуси на бобовых и розоцветных. В работе использованы молекулярно-генетические методы: ПЦР с геноспецифичными праймерами, рестрикционный анализ, гель-электрофорез; биоинформационные методы: анализ нуклеотидного сходства. В результате работы проведена оценка внутривидовой вариабельности нуклеотидной последовательности гена COI у тлей комплекса A. pomi / A. spiraecola. Проведен подбор ферментов рестрикции, позволяющих идентифицировать указанные виды тлей по альтернативному принципу, построены рестрикционные карты и идентификационные ПЦР-ПДРФ таблицы для идентификации A. pomi и A. spiraecola фауны Беларуси. В исследовании проведена оценка применимости и эффективности метода ПЦР-ПДРФ для идентификации тлей рода Aphis L. на яблонях, спиреях и других кормовых растениях, на которых в Беларуси регистрируются как A. pomi, так и A. spiraecola. Показано, что последовательность COI (баркод-регион) этих видов тлей обладает достаточной консервативностью на внутривидовом и вариабельностью на межвидовом уровнях, чтобы можно было разработать ПЦР-ПДРФ ключи для идентификации этих двух видов. Предложен список ферментов рестрикции и их изошизомеров, на основе которого можно составить 88 ПДРФ-ключей, позволяющих идентифицировать виды A. pomi и A. spiraecola по альтернативному принципу. Определена встречаемость A. pomi и A. spiraecola в Беларуси на нескольких кормовых растениях.