Получение флуоресцентно-меченых препаратов бычьего сывороточного альбумина и определение их спектральных характеристик

Abstract

Бычий сывороточный альбумин был модифицирован двумя типами флуоресцентных меток, а именно 4-хлоро-7-нитро-бензофуразаном и N-гидроксисукцинимидным эфиром 4,4-дифтор-4-боро-3a,4a-диаза-s-индацен пропионовой кислоты. Спектры поглощения и эмиссии флуоресценции полученных модифицированных белков характеризовались λпогл. max = 470 нм и λэм. max = 560 нм для конъюгата с 4-хлоро-7-нитробензофуразаном, а также λпогл. max = 510 нм и λэм. max = 520 нм – для конъю-гата с N-гидроксисукцинимидным эфиром 4,4-дифтор-4-боро-3a,4a-диаза-s-индацен пропионовой кислоты. Сравнительный флуориметрический анализ и анализ методом гель-электрофореза полученных образцов подтверждают, что в случае реакции с N-гидроксисукцинимидным эфиром 4,4-дифтор-4-боро-3a,4a-диаза-s-индацен пропионовой кислоты происходит частичное нековалентное связывание (20 %) данного реагента с бычьим сывороточным альбумином за счет гидрофобных взаимодействий. Полученные данные позволяют заключить, что в ковалентном взаимодействии бычьего сывороточного альбумина с обеими флуоресцентными метками участвуют остатки Lys. = Bovine serum albumin was modified by two various types of f luorescent labels, namely 4-chloro-7-nitrobenzofurazan and N-hydroxysuccinimide ester of 4,4-dif luor-4-boro-3a,4a-diaza-s-indazenyl propionic acid. Absorption and fluorescence emission spectra of the modified bovine serum albumin characterized by λabs. max = 470 nm and λem. max = 560 nm for the conjugate with namely 4-chloro-7-nitrobenzofurazan as well as λabs. max = 510 nm and λem. max = 520 nm for the conjugate with N-hydroxysuccinimide ester of 4,4-dif luor-4-boro-3a,4a-diaza-s-indazenyl propionic acid. Comparative fluorimetric analysis and gel electrophoresis of the samples confirms partial non-covalent binding of N-hydroxysuccinimide ester of 4,4-difluor-4-boro-3a,4a-diaza-s-indazenyl propionic acid (20 %) with bovine serum albumin by hydrophobic interactions. The data allow us to conclude that the covalent interaction between bovine serum albumin and both fluorescent labels realized through Lys residues.