Направленная твердофазная иммобилизация креатинкиназы для получения эффективного биокатализатора

Abstract

С использованием методов селективной химической модификации белковых молекул, активации полимерных носителей, расчетов ab initio и оценки функциональной активности осуществлен синтез иммобилизованных препаратов креатинкиназы. Наиболее высокая концентрация иммобилизованной креатинкиназы с сохранением функциональной активности достигалась при связывании нативного белка с бромциан-активированной сефарозой. Химическая модификация по свободным СООН-группам и коньюгирование креатинкиназы с амино-сефарозой сопровождались практически полной инактивацией фермента. Дополнительное обогащение креатинкиназы SH-группами через свободные ε-аминогруппы остатков Lys позволило использовать тиолированный фермент для реакции коньюгирования с тиопропил-сефарозой. Разработанные подходы позволили создать стабильный и функционально активный препарат иммобилизованного фермента для биотрансформации креатина в креатинфосфат.