Провести биоаналитический и биостатистический этапы испытания лекарственных средств Линезолид, таблетки и Линезолид, гранулы : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ; научный руководитель И.В. Семак

Abstract

Объект исследования: валидация методики линезолида в сыворотке крови при испытаниях биоэквивалентности. Цель исследования: разработка оптимальной методики твердофазной экстракции и подбор условий для проведения высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией для количественного определения линезолида в сыворотке крови. Основными методами исследований являются твердофазная экстракция, высокоэффективная жидкостная хроматография, масс-спектрометрия, биостатистика. Результаты работы: - подобран фармакологический аналог в качестве внутреннего стандарта – фуразолидон; - подобран сорбент для проведения твердофазной экстракции: неполярный сорбент - химически модифицированный кремнезем с привитыми октильными группами. Абсолютная степень извлечения линезолида составила (94 ± 5) %; - подобрана хроматографическая колонка Nucleosil 100-5 C18 АВ компании Macherey-Nagel, (Германия)с эффективным хроматографическим разделением, обеспечивающим высокую чувствительность (нижняя граница определяемых концентраций 0,100 мкг/мл), быстроту выполнения (время анализа около 2 мин) и селективность определения.; - сделаны следующие выводы: Методика характеризуется доказанной селективностью (отсутствие значимого влияния матрицы, переноса пробы, других лекарственных и эндогенных веществ на результаты количественного определения линезолида), широким линейным диапазоном определяемых концентраций (y=(0,0953±0,0019)•x; r=0,9999 для диапазона 0,100 – 100 мкг/мл, относительное стандартное отклонение углового коэффициента в один день составило 0,042). Предел определения составил 0,100 мкг/мл (процентная мера правильности 102%, относительное стандартное отклонение 0,046 (n=15, Р=0,95, данные получены в разные дни), предел обнаружения, рассчитанный по 3σ-критерию равен 0,011 мкг/мл. Процентная мера правильности для всего диапазона применения методики при проведении измерений в один день составила 92 – 103% (относительная величина систематической погрешности (δ) составляет от минус 7,8 до +2,7%), в разные дни – 93 – 102% (δ от минус 7,4 до +1,8%). Правильность методики для всего линейного диапазона доказана при помощи расчетов t-критерия. Повторяемость характеризуется величиной относительного стандартного отклонения Sr = 0,035 – 0,100, промежуточная прецизионность - Sr = 0,046 – 0,078. Установлена стабильность стандартных (7 суток при +4С), рабочих (3 суток при +4С). Испытана стабильность образцов при замораживании/размораживании (3 цикла, процентная мера правильности (R) составляет (97±5)%, δ= минус 13 – +6%), при хранении градуировочныхбиопроб в течение 12 часов при комнатной температуре (R=94±4%), а также доказана устойчивость подготовленных образцов при хранении их при +4С в устройстве для ввода образцов (не менее 48 часов, R = (97±5)%, Sr=0,073). Стабильность испытуемых образцов доказана также повторными испытаниями биопроб. Разработанная методика характеризуется удовлетворительной робастностью (устойчивостью) при проведении измерений в разные дни. Доказана правильность и прецизионность методики (устойчивость) при работе с «нестандартной» сывороткой (сыворотка с значительным содержанием липидов и сыворотка крови с выраженным гемолизом). Методика валидирована в рамках протоколавалидации в полном объеме и может быть использована при проведении испытаний биоэквивалености лекарственных средств, содержащих линезолид.