Провести биоаналитический и биостатический этапы биоэквивалентных испытаний лекарственного средства «Валсамлодин », таблетки покрытые оболочкой, 160 мг/10 мг, производства государственного предприятия «Академфарм» : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / БГУ; научный руководитель И.В. Семак

Abstract

Объект исследования: валидация методики определения валсартана и амлодипина в сыворотке крови при испытаниях биоэквивалентности. Цель исследования: разработка оптимальной методики твердофазной экстракции и подбор условий для проведения высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрией для количественного определения валсартана и амлодипина в сыворотке крови. Основными методами исследований являются твердофазная экстракция, высокоэффективная жидкостная хроматография, масс-спектрометрия, биостатистика. Результаты работы: - разработана и полностью аттестована методика хромато-масс-спектрометрического определения валсартана и амлодипина в сыворотке крови при проведении биоэквивалентных испытаний пероральных форм. - выделение определяемых веществ из биопроб выполняли путем твердофазной экстракции (сорбции) на универсальном сорбенте на основе сверхсшитого сополимера полистирола и дивинилбензола (Chromabond HR-X) из слабокислой среды (рН около 3) с последующим элюированием смесью 1,25 мл смеси ацетонитрил - 0,1моль/литр муравьиная кислота в объемном соотношении (90:10); абсолютная степень извлечения валсартана составила (84±6) %, амлодипина – (86±5) %. - в качестве внутреннего стандарта использован фармакологический и химический аналог - МНН - аторвастатин. - разделение выполняли на колонке с неполярной неподвижной фазой на основе химически модифицированного кремнезема с привитыми с триаконтильными группами (Acclaim C30) с градиентным режимом элюирования. - масс-спектрометрическое детектирование осуществляли с использованием электрораспылительной положительной ионизации с регистрацией MRM (исходный ион>дочерний ион): валсартан - 436,3>235,0; амлодипин - 409,2>238,0, 409,2>259,9; тамсулозин - 409,1>227,9; ирбесартан - 429,20>207,0. - сделаны следующие выводы: Методика характеризуется доказанной селективностью (отсутствие значимого влияния матрицы, переноса пробы, других лекарственных и эндогенных веществ на результаты количественного определения валсартана и амлодипина), широким линейным диапазоном определяемых концентраций для диапазона 0,1-20 нг/мл (амлодипина), 0,05-20 мкг/мл (валсартан). Основные характеристики методики определения валсартана и амлодипина в сыворотке крови показаны в таблице 1. Установлена стабильность стандартных (10 суток при +4 С), рабочих (1 сутки при +4 С) и градуировочных растворов (при минус 20 С – около 130 суток). Испытана стабильность образцов при замораживании/размораживании (3 цикла), при хранении градуировочных биопроб в течение 12 часов при комнатной температуре, а также доказана устойчивость подготовленных образцов при хранении их при +4 С в устройстве для ввода образцов (не менее 48 часов). Стабильность испытуемых биопроб доказана также повторными испытаниями. Методика валидирована в рамках протокола валидации в полном объеме и может быть использована при проведении испытаний биоэквивалености лекарственных средств для приема внутрь, содержащих валсартан и амлодипин.