Гидролитические ферменты микроорганизмов — субстанции для заместительной ферментотерапии

Abstract

Изучена способность к образованию агрегатных форм и устойчивость к эндогенной протеолитической инактивации концентрата культуральной жидкости B.subtilis. Установлено, что при долгосрочном хранении жидкого концентрата не наблюдается образования межмолекулярных дисульфидных связей и нековалентных агрегатов с участием a-амилазы и других белков. Определены условия экспресс-анализа содержания a-амилазы методом жидкостной хроматографии высокого давления. Разработана схема получения в гомогенном состоянии целевого фермента концентрата культуральной жидкости— a-амилазы, включающая в качестве последовательных стадий очистки фракционирование сульфатом аммония, ионообменную хроматографию, хроматографию гидрофобных взаимодействий и гель-фильтрацию. The ability to form aggregates and the stability to endogene proteolytic inactivation of B.subtilis cultural-liquid concentrate were investigated. It was found that no formation of intermolecular disulphide bonds and noncovalent aggregates with the participation of a-amylase and other proteins was observed on long storage of the liquid concentrate. The conditions of quick quantitative analysis for a-amylase by HPLC are determined. A scheme is developed of producing the target enzyme of the cultural-liquid concentrate, that is, a-amylase, in homogeneous state. It comprises the following sequence of purification operations: fractioning with ammonium sulphate, ion-exchange chromatography, chromatography of hydrophobic interactions and gel filtration.