Разработать клеточные модели воспаления различного генеза и провести поиск новых эффективных противовоспалительных средств среди природных полифенолов : отчет о научно-исследовательской работе (заключительный) / научный руководитель В. А. Костюк

Abstract

Объект исследования – культивируемые нормальные кератиноциты, кератиноциты линии HaCaT, меланоциты и эндотелиальные клетки человека из пуповинной вены человека HUVEC. Цель работы – разработать и апробировать альтернативные клеточные модели воспаления различного генеза. Методы – молекулярно-биологические, биохимические, биофизические, флуоресцентной микроскопии, статистические. Приборы – спектрофотометры СФ-46, Specord M-40, флуоресцентный инвертируемый микроскоп Axiovert 25, спектрофлуориметр SFL-1211A, термостат GP-200, система для проведения полимеразной цепной реакции в реальном времени «MiniOpticon Real-Time PCR Detection System» (Bio-Rad, Hercules, США) и Real-Time PCR Detector Chromo4 Four-Color (Bio-Rad, CШA). В результате проведенных исследований качественно и количественно охарактеризованы воспалительные ответы в различных типах культивируемых клеток человека (кератиноцитах, меланоцитах и эндотелиальных клетках) при воздействии ультрафиолета, бактериального токсина, продуктов окисления поверхностного кожного жира (окисленный сквален, 4-гидрокси-2-ноненаль), органических пероксидов (ди-трет-бутил пероксид). Экспериментально доказано, что сквален, компонент поверхностного кожного жира (sebum), выполняет функцию УФ-сенсора. Показано, что образующиеся в результате воздействия ультрафиолетового облучения продукты фотоокисления сквалена ответственны за воспалительный ответ клеток кожи. Проведены сравнительные исследования нормальных кератиноцитов кожи человека и спонтанно иммортализованной («бессмертной») линии кератиноцитов HaCaT, широко используемой в молекулярной фармакологии. Сделан вывод, что в качестве адекватного модельного объекта при тестировании противовоспалительных средств и фотопротекторов для кожи могут использоваться только НК. Определены оптимальные экспериментальные условия моделирования воспалительных процессов различного генеза. Разработанные клеточные модели для тестирования потенциальных фотопротекторов, противовоспалительных и антиатерогенных фармакологических средств апробированы при исследовании противовоспалительной активности фармакологически значимых природных полифенольных соединений.