Целестиновый синий В – зонд для регистрации продукции хлорноватистой кислоты и HOCl-модифицированных белков

Abstract

Цель исследования – изучить продукцию хлорноватистой кислоты (HOCl) и ее производных, обусловленную активностью миелопероксидазы нейтрофилов крови человека, флуоресцентным методом с использованием целестинового синего B. Материалы и методы. Нейтрофилы выделяли из венозной крови здоровых доноров. В качестве агонистов использовали форбол 12-миристат 13-ацетат, N-формил-метионил-лейцил-фенилаланин, лектины растительного происхождения, белки, модифицированные гипогалоидными кислотами. В качестве ингибиторов активности миелопероксидазы нейтрофилов и/или перехватчиков HOCl использовали N-ацетилцистеин, гидразид 4-аминобензойной кислоты, изониазид и церулоплазмин. Результаты. В ходе исследований с применением широкого спектра агонистов и ингибиторов активности миелопероксидазы нейтрофилов и/или перехватчиков HOCl было доказано, что целестиновый синий B окисляется в суспензии стимулированных нейтрофилов в результате продукции ими HOCl и ее производных, обусловленной активностью миелопероксидазы. Окисление целестинового синего B наблюдалось и HOCl-модифицированным сывороточным альбумином человека (HSA-Cl). Моноклональные антитела класса IgM против HSA-Cl ингибировали окисление целестинового синего B в растворе модифицированного белка. Заключение. Разработанный метод позволяет с высокой чувствительностью анализировать HOCl-модифицированные белки (хлорамины и др.), исследовать влияние различных агонистов и лекарственных препаратов на респираторный взрыв нейтрофилов, экзоцитоз и активность миелопероксидазы. Ключевые слова: целестиновый синий B; хлорноватистая кислота; миелопероксидаза; нейтрофилы; флуоресценция.